Как проходят мои эксперименты с in-vitro
Сегодня суббота, а это значит, что я еду в свою лабу ставить очередной эксперимент. Почти все семена васаби я распродал, но и себе немного оставил. Пришла пора их высадить в стерильных условиях. Все приготовления, которые можно сделать без стерильных условий я произвожу дома, попивая кофеёк: мою посуду, готовлю среду, автоклавирую всякое, подготавливаю экспланты и пр. Потом собираю всё в сумки и еду к ламинару, который находится в бытовке в Путилково.
Список дел при приготовлении обычно довольно большой, поэтому, чтобы ничего не забыть, я разбиваю его на тудушки. А т.к. работа по большей части шаблонная, то очень удобно копировать тудушки с прошлого эксперимента и вносить правки под текущий эксперимент.
По каждому эксперименту я веду журнал, что именно планирую сделать. А по итогам записываю, что получилось.
Вот так, например, выглядит сегодняшний день (это копипаста из моего блокнота, решил ничего не править):
### E77 15.08.26
Сажаем семена, собранные с сорта васаби из трубы, который я считаю высоким. Опылял это растение от другого, которое тоже называю высоким.
Семена были в закрытом соуснике в нулевой зоне холодильника около двух месяцев. Семена в собственной шелухе. Дополнительно не увлажнял.
Сажаю в 4 тары: петри 70 мм, соусник 30 мл, зип-пакет с вентиляцией, планшет на 24 лунки
Среда: 1/2 MS, 100% витаминов, сахар 10 г/л, без гормонов
- После высадки отправляю снова в холодильник на 10 суток в нулевой зоне,
- затем плавно поднимаю до максимума холодильника еще на 7 дней
- Затем переношу в коридор, где температура 20 градусов
E77 — это порядковый номер эксперимента. Это значит, что до этого я провёл уже 76 экспериментов. Если происходит пересадка эксплантов внутри эксперимента, то к числу добавляется суффикс. Например, когда я пересажу Е77 на свежую среду, то будет E77.1.
А вот так выглядит список дел для E77. Тоже копипаста из блокнота, т.е. список чисто для себя. Многие очевидные мне вещи тут опущены, некоторые, возможно вам будут непонятны, но цель расписывать весь процесс я перед собой тут не ставлю — это достойно отдельной статьи.
### E77 15.08.26
- [ ] Помыть колбы и все петри
- [ ] Стерилизация петри в духовке
- [ ] Помыть автоклав
- [ ] Залить воду. 4 банки + 1 банка 110 мл
- [ ] Автоклав 1
----- [ ] Вода 4 банки
----- [ ] 1 банка с водой для цефотаксима
----- [ ] 1 банка для гипохлорана 110 мл
----- [ ] 1 банка побольше, куда вылью среду для лунок в планшете
- [ ] Запустить стерилизацию лабы + сухожар
- [ ] Почистить семена
- [ ] Калибровка pH-метра + предварительно отмыть от грязи
- [ ] Приготовить среду
----- [ ] Дюшефу 0.66 л
--------- [ ] Сахар 6.6 (10 г/л) г
--------- [ ] Гельрит 1.45 г (2.2 г/л)
--------- [ ] Смесь MS 1.45 г (2.2 г/л)
--------- [ ] Вит 33 мг (50 мг/л)
--------- [ ] MES 0.33 (0.5 г/л)
----- [ ] KOH До кипячения доводим до pH 6.0
- [ ] Проветривание лабы запустить
- [ ] Автоклав 2 - 20 мин, 121
----- [ ] Среда - 0.33 л х2
----- [ ] Фильтр 1 шт
----- [ ] Заварочники
----- [ ] Пакеты с вентиляцией - 4
----- [ ] Соусники 15 шт
- [ ] С собой
----- [ ] петри м
----- [ ] Семена
----- [ ] Банки
----- [ ] Вода
----- [ ] среда
----- [ ] Фильтр
----- [ ] Цефотаксим
----- [ ] Перекись 3%
----- [ ] Гипохлоран
----- [ ] Соусники
----- [ ] Планшет
----- [ ] Зип-пакеты
----- [ ] б пинцеты 2
----- [ ] Шприцы
- [ ] Процесс
----- [ ] остудить среду очень хорошо
----- [ ] Разводим антибиотик
----- [ ] Готовим гипохлорит 0.5% 20 мл / 110 мл + несколько капель твин 20
----- [ ] Среда
--------- [ ] Цефотаксим 1.65 мл (500 мг/л) **Через фильтр**
----- [ ] Разливаем по банкам
----- [ ] Стерилизация
--------- [ ] Спирт 70% - 20 сек
--------- [ ] Гипохлоран 0.5% - 8 мин
--------- [ ] Перекись 3% - 1 мин
--------- [ ] Промывка 3 раза
----- [ ] Высадка
Пунктов довольно много, и важно ничего не пропустить. Особенно больно уехать в лабу и забыть что-то важное дома. Поэтому я стараюсь тщательно следить за списком вещей, которые нужно взять с собой.
Сколько времени занимают подобные эксперименты? Обычно я стартую все приготовления где-то в 12-13 часов дня и возвращаюсь домой из лабы в 20-24 часа, в зависимости от трудоёмкости процесса. Если надо ковырять меристему под микроскопом, а эксплантов я набрал целую кучу, то процесс может затянуться, а если просто пересадить экспланты на свежую среду, то гораздо быстрее.










