Микроскопия

Но если хотите красивых картиночек - их есть у меня!
Берем пациента за палец, вероломно кусаем его скарификатором и набираем в микровету некоторое количество крови. Часть забирает себе гематологическая аппаратура, которая посчитает общее количество лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов, уровень гемоглобина и другие не менее важные показатели. Часть крови капаем на стекло, и с помощью специальной лопаточки или другого стекла растягиваем каплю в красивый мазок. Сушим его, отправляем в буфер, а потом в краску. Окрашивание по Романовскому, в составе краски находится метиловый спирт, глицерин и два типа красителя - эозинат (окрашивает ацидофильные, т.е. кислотосодержащие компоненты в оттенки красного) и азур (окрашивает базофильные, т.е. щелочные компоненты в оттенки синего и фиолетового).
В мазке очень важен сформированный тонкий край, так называемая "метёлочка", в которой все клетки лежат в один слой, отдельно друг от друга, и их можно хорошо рассмотреть после окрашивания.

Окрашенный мазок. Видна толстая часть и тонкая часть "метелочка".

При микроскопии используется иммерсионное масло. Клетки на столько плотно припаиваются к стеклу во время приготовления мазка, что в сухую оттереть их сложно даже ветошью. Но чуть попадет влага - все тут же сотрется.

Слева - картина мазка в толстом месте. Темные кучи - слепленные друг с другом эритроциты. В таком месте подсчет клеток вести нельзя. Справа - вид мазка в тонком месте. Клетки четко видны, лежат отдельно друг от друга, полностью прокрашены.

В мазке оцениваются эритроциты, а также лейкоциты в виде формулы, где из 100% вычисляется количество каждого типа встреченных лейкоцитов.

Все клетки крови в той или иной степени друг другу родственники. Так как все появляются в костном мозге в результате деления клеток предшественников. В периферическую кровь попадают созревшие клетки, и один из главных признаков их зрелости - неспособность к делению. Кровяное русло для них - либо место работы, либо временный транспорт до места работы.
Приведу картинку с их генеалогическим древом, чтобы было немного понятнее, о какой части многообразной семьи и дет речь в данный момент.

Самые многочисленные "обитатели" внутреннего мира человека - эритроциты. Эти трудяги таскают к нашим тканям кислород и из тканей - углекислый газ. За трудолюбие эволюция лишила их ядра, место которого занимает крупный белок гемоглобин, выполняющий основную функцию. Ядро исчезает из эритроцитов не сразу, а постепенно разрушается в процессе созревания. Если есть необходимость оценить то, как костный мозг вырабатывает новые эритроциты, можно с помощью специальных красителей оценить количество ретикулоцитов - молодых эритроцитов с остатками ядра.

К сожалению, не самое лучшее изображение из "личных запасов". Но тем не менее, видно, что зрелые эритроциты без ядер представляют собой серо-зеленые тени. А в незрелых ретикулоцитах прокрашены синие остатки ядра.

По разным патологическим причинам бывает так, что эритроциты растут неправильных форм и размеров. Это могут быть как дефекты в их клеточной стенке, так и в структуре гемоглобина. Если у эритроцитов сильно отличается размер, это называют анизоцитозом, а когда сильно отличается форма - пойкилоцитозом.

На данном мазке представлен анизоцитоз. Есть как совсем мелкие микроциты, и крупные макроциты.

Следующие, о ком хочется рассказать - Лейкоциты. Это разнородная группа ядросодержащих клеток, с различными функциями.

Гранулоциты. Характерные особенности - наличие гранул в цитоплазме (потому и гранулоциты), а также изменение формы ядра в процессе созревания. Изначально круглое, оно становится сначала в форме фасолины, затем истончается до формы изогнутой палочки, а затем до фрагментарных сегментов. В периферической крови в норме находятся гранулоциты с сегментированным ядром, и в малых количествах - с палочковидным. Более молодые формы в норме находятся в костном мозге.

Нейтрофилы - гранулоциты с нейтральным типом окраски. В крови встречаются чаще всего сегментоядерные (полностью зрелые) и палочкоядерные (в малых количествах, немного "недозревшие"). Сегментоядерные составляют 52-72% от всех лейкоцитов, палочкоядерные - 1-4%.

Слева - палочкоядерный нейтрофил, справа - сегментоядерный нейтрофил.

Назначение у этих ребят - прежде всего, фагоцитоз (поглощение и разрушение) микроорганизмов. В гранулах цитоплазмы содержатся вещества, способные растворить практически любой микроорганизм за счет около 20 разных ферментов, а также разрушить ткани в очаге воспаления. Часть нейтрофилов постоянно находится в крови, а часть формирует пул в тканях.
Эозинофилы. Гранулоциты с оксифильным типом окраски. Окрашиваются в оттенки красно-оранжевого, с большим количеством гранул в цитоплазме. Их количество в тканях, соприкасающихся с окружающей средой, значительно больше, чем количество в крови. Составляют 2-4%.

Картинка из интырнетов. Зрелые эозинофилы в периферической крови.

Картинка из личных запасов. Костный мозг. Очень "молодой" эозинофил с округлым ядром, в цитоплазме видно большое количество гранул.
В гранулах эозинофила находится катионный белок и большое количество перекисей, имеющих бактерицидную активность. Помимо этого, они способны разрушать некоторые личинки гельминтов, нейтрализовать гепарин и гистамин - основные биохимические маркёры воспалительных процессов и аллергических реакций. Они слабо способны к фагоцитозу, но очень хорошо способны к внеклеточному цитолизу.

Базофилы. Гранулоциты с базофильным типом окрашивания. Очень редкие гости, поэтому картинка из интернетов. Составляют до 1% лейкоцитов, но чаще вовсе не показываются, за три года работы мне попадались всего пару раз.

Базофил. Картинка из пикабушного поста на похожую тему. (Наши внутренние войска: базофилы и тучные клетки)

Темные "антагонисты" эозинофилов. Синюшные, с большим количеством гранул, содержащих медиаторы воспаления - гистамин и гепарин. Отвечают за сенсибилизацию организма к какому-то конкретному типу аллергенов. А также выделяют вещества хемотаксиса, "призывая" в очаг воспаления вышеуказанные типы гранулоцитов.

Агранулоциты. Не содержат в цитоплазме гранул. Представлены лимфоцитами и моноцитами.

Лимфоциты. Как и все клетки, растут в костном мозге, но созревают вне его. Составляют 19-37%.

По количеству функций лимфоциты - самая разнородная группа, отвечающая и за иммунную память, и за деструкцию клеток, инфицированных вирусами, с признаками опухолевого процесса, или подозрительно быстро делящиеся. Они занимаются в том числе и регуляцией кроветворения (гемопоэза), контролируя созревание и дифференцировку всех других клеток. Однако в микроскопе отличить их друг от друга практически нереально. (Да и зачастую нет необходимости на том этапе оказания медицинской помощи, на котором я работаю).

Лимфоциты в мазке.

Моноциты. Составляют 3-10%. После транспортировки из кровяного русла в ткани становятся макрофагами и обладают тканевой специфичностью. Наибольшее количество живет в печени (56%), легких (15%), селезенке (15%), брюшной полости, нервной системе, костной ткани. Тканевые макрофаги живут долго - месяцы и года. Их основная функция - фагоцитоз, а также участие в процессах репарации (восстановления) тканей, неспецифической защите, активации специфической защиты, участвуют в метаболизме металлов.

Моноцит в мазке, рядом с ним - сегментоядерный нейтрофил.

Тромбоциты. Не являются клеточными структурами в широком понимании. Представляют собой скорее отшелушенные кусочки клеточной стенки, которые постепенно отшнуровываются от большого мегакариоцита в костном мозге. Отвечают за одно из звеньев свертывания крови, способны образовывать сгустки.

Маленькие красные точки - тромбоциты.

В лейкоцитарную формулу не входят. Обычно тромбоциты подсчитывает аппаратура, но иногда в спорных моментах их требуется посчитать глазами на 1000 эритроцитов.

Отдельной категорией хотелось бы отметить бласты. Это незрелые клетки-предшественники, вышедшие из костного мозга. Их характерная особенность - деспирализованный хроматин (то есть, они находятся в состоянии, готовом к делению, что в периферической крови быть не должно), иногда - наличие ядрышек. У неделящихся клеток содержимое ядра более темное, структурированное в виде глыб. У бластов же содержимое ядра более светлое и рыхлое.

Если они попадаются в мазке, то их включают в общую лейкоцитарную формулу.

В норме бласты не должны встречаться, однако их наличие не всегда говорит о тяжелых патологиях костного мозга, так как бласты могут появится и как ответ на выраженное воспаление, из-за возросшей нагрузки на костным мозг. В этом случае после стихания воспалительных процессов бласты перестают появляться.

Визуально отличить бласты одни от других сложно, как и лимфоциты, да и зачастую нецелесообразно на моем этапе оказания помощи. Но существует много различных методик по их дифференцировке, от детекции различных химических веществ, характерных для тех или иных клеток, до генетических методов.

Спасибо за внимание. Напоследок покажу еще одну не менее красивую область - биохимию.

Кюветы биохимического анализатора после работы. Очень красочно.

Всем добра, и не болейте.