Хроматография. Если хроматограмма плохая
Пишу больше для себя. Но если информация кому-то из коллег будет полезна, это тоже отлично.
Я работаю (в том числе) по методике анализа аминокислот в самых разных образцах с разделением на натрий-ионообменной колонке (ионообменная хроматография) с дериватизацией нингидрином. Это хороший и чувствительный метод, не требующий особых подготовительных этапов (образец гидролизуется в горячей соляной кислоте около 24 часов, приводится к рН = 2,20, разбавляется таким же буфером 1 : 1 и готов к вводу в хроматограф).
В прошлом году работу по этой методике я закончил в октябре и до середины января больше к ней не возвращался, так как были другие работы. Соответственно хроматографическая колонка была убрана в холодильник.
Колонка, к слову, выглядит так:
Na-ионообменная колонка (внизу) и ловушка аммиака (вверху), который может испортить всю хроматограмму, поэтому до окончания анализа он удерживается, а потом смывается с ловушки.
Когда работа снова началась, на выходе я получал вот такую хроматограмму:
В сравнении с обычной она выглядела крайне странно и такого в моей практике не было ни разу. Нормальная хроматограмма выглядит так:
Обычная хроматограмма раствора смеси аминокислот (стандарт). Все пики хорошо разделены, но ручная обработка пока еще не выполнена.
Ни раствор стандартов, ни какой-либо реальный образец не получалось поделить так, как это происходило обычно.
В этих случаях перебор вариантов того, где проблема, можно начинать с любого конца. Сначала я заменил буферные растворы, в которых ведется разделение, на новые. Ничего не изменилось. Потом проверил, нет ли где течи в системе (хотя это и не связано напрямую с результатами).
По параметрам прибора всё выглядело прекрасно. Давления и температуры на всех этапах устанавливались отлично. Попробовал промыть колонку дольше, чем это установлено в настройках метода. Промывал примерно час, но результат был тем же.
В итоге решил попробовать способ, который, наверное, выручил не одну лабораторию – перевернул хроматографическую колонку.
Хотя на большинстве, если не на всех, колонок указано направление потока подвижной фазы (и устанавливать производитель рекомендует именно так), иногда в структуре сорбента (или другого наполнителя) происходят изменения (например, если в ходе предыдущих анализов было превышено давление в системе или в колонку попали сложно смываемые вещества, которые скопились в одном из концов колонки и т. д.). Эти изменения, как мы понимаем, сохраняются при сохранении направления потока в колонке.
Перевернув её, мы меняем направление потока на противоположное и таким образом можем реанимировать колонку. На самом деле, направление потока на колонке, указанное производителем, не столь важно, как может показаться. Свойства сорбента на всей длине колонки практически всегда одинаковы. Может быть, есть колонки, которым противопоказано переворачивание, но у меня в хозяйстве таковых не водится.
Поэтому перевернуть колонку в случае, если с анализом что-то не так, вполне допустимо и, может быть, это исправит ваш анализ.
Пост короткий, мало информативный и содержит только личный опыт и личные рассуждения. В практике данный опыт применялся один раз, что стало поводом для небольшого изменения в порядке работы (например, теперь после некоторых образцов я отмываю систему смесью изопропанола и ацетонитрила в воде).