Всем привет! Я - биолог КДЛ (клинической лабораторной диагностики) и продолжаю рассказывать, что происходит за дверями медицинской лаборатории. Не ждите от меня фундаментальных знаний и теории, это ж Пикабу!
Вот так выглядит планшет для ИФА. На моей старой работе я, чаще всего, делала эти методом ХГЧ (хорионический гонадотропин человека, гормон такой, повышается при беременности и некоторых других состояниях, чем больше срок беременности, тем значение ХГЧ выше). Принцип определения остальных гормонов сходен.
Все начинается с того, что у женщины берут венозную кровь вот в такую пробирку с гелем:
Затем, по прошествии некоторого времени, кровь центрифугируют вот, примерно, на таком аппарате:
И гель, имеющий плотность среднюю между форменными элементами и сывороткой, встаёт посередине между ними, образуя такую картину:
Все, теперь кровью можно пользоваться. Берется набор ИФА для определения ХГЧ, включающий в себя планшет, как на самом первом фото в посте и реактивы. А, ну ещё инструкцию. В каждой лунке планшета на производстве закладывают специфические антигены, которые свяжутся с антителами (если таковые будут в наличии) из крови. Принцип метода выглядит так:
В первые 7 лунок раскапыввются калибраторы с заведомо известной концентрацией. В остальные - сыворотка пациентки + она же в 2-х или 3-х развелениях, в зависимости от срока беременности. У нас это было, как правило, разведение в 20 и 400 раз. Раскапывается уонъюгат. Пробирки, обычно стоят вот в таком штативе, важно их не перепутать...
Тут пробирки цветные, но для ИФА используются жёлтые. Или красные. Для Д-димера -голубые. Цвет пробирки означает какой в нем напылен реактив. Анализы делаются строго из пробирок определенного цвета. И вот так это все происходит.
Планшет подписывается м отправляется на час в термостатируемый шейкер ("трясучку") инкубироваться. Это такая нагреваемая до нужной температуры движущаяся платформа. На фото она на заднем плане. Пока планшет инкубируктся самое время начать раскапывать новый на что-то другое. Или идти делать биохимию. Или ещё что-то. Иногда - пойти обедать... Затем планшет промывается разбавленным промывочным раствором из комплекта.
В нем есть трубочки, по каторым подаётся и забирается обратно жидкость. Ну вот такие:
Все. В случае с ХГЧ заливается раствор ТМБ (вы не хотите знать расшифровку, она вам ничего не скажет)), или в просторечии "краску". В зависимости от содержания искомого вещества через 10-15 минут (время для каждого анализа ИФА индивидуально, и не всегда совпадает с инструкцией) в каждой лунке будет окрашивание от голубого до синего. Ну вот так примерно:
ХГЧ - это простейший случай, и инкубация одна. В гепатитах, например, их две, да ещё и конъюгат разводить надо... Ну так вот, после того как исследователь счёл, что контроли достаточно окрасились и не перекрасились, он достает планшет из темного места и заливает в каждую лунку стоп-реагент. Все что было синим, стадо жёлтым. Затем планшет помещается в прибор для измерения оптической плотности (интенсивности окраски). В самом простом варианте такой:
У него в программе заданы значения калибраторов (я их по вредной привычке называю "контролями") и прибор строит калибровочную прим по соответствующим заданым значениям концентрации измеренным прибором оптическим плотностям. Исследователь проверяет насколько прямая действительно прямая, не выбивается ли чего. Теперь прибор изменяет все остальные пробы и проделывает ровно обратное действие: по значениям оптической плотности находится концентрация. Все. Концентрация у нас есть. В случае разведение она умножается на степень разведения и выдаётся пациенту.