Мой прошлый пост стал популярным, его сохранили 340 человек. В этот раз добавлю личные фото. Продолжаем...
Вам вдруг срочно понадобились клетки печени, но вы не знаете как их посадить и вырастить?
Тогда этот простой рецепт для вас!
Для этого вам понадобится:
1. Печень
2. Натрий-фосфатный буфер PBS
3. Трипсин
4. ЭДТА (Этилендиаминтетрауксусная кислота) с антибиотиком
5. Культурная среда DMEM
6. Скальпель
7. Пинцеты
8. Ножницы
9. Серологические пипетки
10. Чашки Петри
11. Фильтр для клеток
12. Микроскоп
13. Инкубатор
ПРОТОКОЛ
1. Отделить скальпелем кусочек ткани 1 см из животной печени, поместить в чашку Петри.
2. Промыть кусочек 3 раза в ЭДТА с антибиотиком (1%).
3. Используя ножницы и скальпель, измельчить ткань до кашеобразного состояния.
4. Добавить 5 мл раствора трипсин /ЭДТА (1 мл/4 мл). Все перемешать в пробирке и поставить на 2 часа в инкубатор 37 градусов.
5. Пропустить ваш раствор через клеточный фильтр, чтобы в растворе остались только клетки. Центрифугировать раствор на 3000 об в минуту 5 минут.
6. Убрать пипеткой жидкую часть.
7. Промыть 3 раза клетки в DMEM (шаги 5 и 6).
8. Добавить 10 мл DMEM в клетки, перемешать и посадить в новую чашку Петри.
9. Поставить в инкубатор на неделю.
П.с. наши клетки называются гепатоциты
10. Клеткам тоже надо кушать, поэтому через неделю замените культурную среду на новую DMEM. Заодно и посмотрите в микроскоп, во сколько раз увеличилась ваша культура.
Вы получили ваши первые клетки печени!
Вы восхитительны!
Поздравляем!