Комбинируя методы поляризации света, можно с высокой точностью выявить скрытую молекулярную ориентацию!
Качество изображения определяет разницу между потрясающим мультимедийным опытом и визуальным разочарованием. В биомолекулярной визуализации детали имеют особое значение. Увеличение разрешения в количественной визуализации повышает точность и уверенность в результатах, что способствует открытиям в исследованиях белков, клеток и других биомедицинских приложениях.
Ученые давно изучают отдельные молекулы, чтобы исследовать их наномасштабные структуры и динамику в биологических системах. Однако различение двух близко расположенных дипольных эмиттеров, флуоресцентных молекул, оставалось серьезной проблемой, особенно когда такие молекулы излучают свет одновременно и пространственно совпадают.
Это ограничение мешало исследователям точно измерять ориентацию и угловое разделение диполей, что важно для понимания их вращательной динамики в клеточных средах.
Новое исследование, проведенное Мэтью Лью и Ийяном Ченом из Вашингтонского университета, доказывает, что существующие техники поляризационной визуализации не могут различить две совпадающие дипольные молекулы от одной.
Чтобы решить эту проблему, Лью и Чен объединили два метода, манипулируя поляризацией лазерного освещения и измеряя поляризацию собранной флуоресценции. Их техника улучшает точность измерения ориентации между парами молекул.
"Структура всегда определяет функцию", — отметил Чен. Структуры белков и других биомолекул определяют поведение клеток. Например, антитела должны правильно взаимодействовать с вирусными антигенами, что зависит от их ориентаций.
Чен и Лью разработали математические детали, чтобы показать, что пары диполей производят изображения, идентичные изображениям одной вращающейся дипольной молекулы. Комбинирование поляризованного освещения и поляризационного обнаружения флуоресценции создает уникальные изображения для одной и двух молекул.
Метод улучшает точность измерения ориентации дипольной молекулы на 50% и увеличивает точность измерения углового разделения в два-четыре раза по сравнению с традиционными методами.
Это улучшение имеет потенциал изменить подход к изучению молекулярной динамики, особенно в живых системах, где важны наблюдения в реальном времени. "Чтобы продвигать науку вперед, детали имеют значение", — добавил Лью. "На наноуровне важно рассматривать молекулы как диполи, чтобы правильно измерять направление и интенсивность света, который они излучают." Разрешая молекулярные структуры и динамику с большей точностью, метод может поддерживать приложения от изучения взаимодействий белков до разработки лекарств и исследования заболеваний.