Снимаем микрофотографии в цвете с помощью чёрно-белой CCD камеры
Достаточно часто бывают ситуации, когда в лаборатории есть флуоресцентный микроскоп, традиционно оснащённый чёрно-белой CCD камерой (они дешевле, прекрасно справляются с поставленными задачами и обеспечивают более чёткое изображение), но нет подходящего микроскопа для цветной фотографии. Во многих современных научных биомедицинских проектах микроскопия образцов в цвете часто имеет довольно низкий приоритет, а многие гистологические измерения можно выполнить и на основе монохромных кадров. Поэтому PI и не торопятся вкладывать деньги в поддержку цветной микрофотографии.
И все же для ряда окрашиваний цветные снимки бывают нужны. На самом деле сделать цветные снимки можно и с помощью монохромной CCD камеры. Для этого нужно просто разложить свет на цветные компоненты с помощью красного, синего и зелёного фильтров и для каждого канала записать монохромные данные яркости и контраста. Техника открытая более 150 лет назад, английским математиком Джеймсом Максвеллом и хорошо знакомая астрономам.
Всё, что Вам потребуется это приобрести цветные светофильтры, которые физически подходят к оптической системе вашей конкретной модели микроскопа. Отличные результаты дают недорогие астрономические LRGB фильтры с ценовым диапазоном от 20-50$, (L-фильтр вам, скорее всего не потребуется), но в качестве импровизации может подойти любой прозрачный предмет нужных цветов, например цветная плёнка или пластик. Чёткость изображения и цветопередача при этом, конечно, может быть ниже.
C помощью окуляров нужно найти интересующий ваш участок на срезе и добиться наилучшего фокуса. Дальше не меняя фокуса (на больших увеличениях с объективами 20х+ добетесь оптимального фокуса для каждого фильтра) и положения препарата нужно, последовательно установить красный, зеленый и синий фильтры в микроскоп и для каждого фильтра сделать отдельный монохромный снимок, не забывая, помечать в названии файла с каким фильтром снимок был сделан.
Сборку цветных фотографий при этом проще всего производить в Image J. Для этого нужно открыть три монохромных снимка соответствующих красному, зелёному и синему каналу и собрать их цветное изображение с помощью команды Image -> Color -> Merge Channels.
Полученное цветное изображение можно сохранить в любом удобном формате и продолжить обработку и кадрирование в любом привычном графическом редакторе. Такую же технику можно использовать для создания цветных снимков на любом монохромном оборудовании.
Микропрепарат человческой роговицы глаза. Окрашивание гематоксилином и эозином, цветное изображение получено сборкой RGB кналов. Микроскоп EVOS FL (Thermofisher Scientific) 05.2107.
Полученные таким образом изображения будут немного более качесвтенные чем полученные с помощью цветной CMOS матрицы со схожими характеристиками, врочем зачастую эта разница малозаметна и не столь важна. Для больших объёмов гистологической работы в цвете, всё-таки стоит приобрести специализированный микроскоп.