Фотографии клонированных собак
Публикую фотографии фотографий клонированных собак в лаборатории клонирования в Сеуле, где сейчас нахожусь. (В углу - города страны хозяев)
В комментариях сюрприз!
Публикую фотографии фотографий клонированных собак в лаборатории клонирования в Сеуле, где сейчас нахожусь. (В углу - города страны хозяев)
В комментариях сюрприз!
Услышал в разговоре корейских коллег в институте клонирования в Сеуле. Клиент вроде какой-то футболист из Москвы (по корейски мало что понимаю).
Стоимость клонирования собаки= 100 000 долларов = 7 797 270.96 российских рубля (по сегодняшнему курсу).
Вам вдруг срочно понадобились эмбриональные стволовые клетки, но вы не знаете как их получить?
Тогда этот простой рецепт для вас!
1. Беременная мышь (14 дней)
2. Спирт 70%
3. Ножницы
4. Скальпель
5. Пинцеты
6. Чашки Петри
7. Раствор трипсина-ЭДТА 0,05%
8. Серологические пипетки
9. Шприц 10 мл
10. Инкубатор
11. Морозильник
12. Жидкий азот
13. Углекислый газ
14. Натрий-фосфатный буфер PBS
15. Диметиллсульфоксид DMSO
16. Флаконы для культур клеток
17. Микроскоп
18. Культурная среда MEF
19. Криопробирки
20. Криоконтейнер
21. Гепмоцитометр
22. Центрифуга
23. Изопропанол
ПРОТОКОЛ
1. Усыпить беременную (день 13-14) ICR мышь с помощью CO2.
2. Положить на спину и обработать 70% этанолом. Используя ножницы, сделайте разрез на брюшке. Осторожно вырежьте матку с помощью стерильных ножниц и пинцета, затем поместите в чашку Петри со стерильным PBS.
3. Отделите эмбрионы от матки, освободить эмбрионы от амниотического мешка, затем переместить эмбрионы во вторую чашку Петри содержащую стерильную PBS.
4. Под препараторным микроскопом, убрать из эмбрионов головы, печень, кишечник, сердце и все внутренности используя два пинцета.
5. Переместите туши эмбрионов в чистую чашку Петри. Осторожно нарубите эмбрион на мелкие кусочки стерильным скальпелем или ножницами (около 1x1 мм). Добавить 5.0 мл 0.25% трипсин/EDTA на каждые 10 плодов, и соберите всё и перемешайте 10 мл пипеткой.
6. Переместите смесь ткань/трипсин с помощью пипетки из чашки Петри в 10 мл шприц с иглой на 18. Закрыть поршнем шприц, переворнуть и осторожно убрать воздух, затем осторожно, нажать и пропустить смесь ткань/трипсин через иглу, и собрать всё в 50 мл коническую пробирку (флакон). Осторожно пропустить смесь через иглу второй раз.
7. Инкубировать смесь ткани 15 минут при 37°C, перемешиванием 3 или 4 раза с использованием 10 мл пипетки, чтобы отделить ткань. Добавить равный объем полной среды MEF для деактивации трипсина.
8. Энергично перемешать смесь с помощью 10 мл пипетки.
9. Поместить 1 эквивалент эмбрионового эквивалента в флакон для культур клеток Т175 и добавить полную MEF среду, чтобы окончательный объем составил 30 мл на флакон. Эта плотность позволяет клеткам придерживаться, но не позволит им чрезмерно разливаться до сбора клеток через 3-4 дня. Инкубируют при 37 ° С и 5% СО2.
п.с. Наши клетки называются Мышиные эмбриональные фибробласты MEF
10. Как правило, диссоциированные MEF прикрепляются к флакону и начинают делиться за ночь. Заменить среду на следующий день с равным объемом свежей и полной MEF среды. Через 3-4 дней, когда клетки становятся почти слившимися, MEF клетки готовы быть заморожены. Прополоснуть клетки один раз свободным от Ca2 + / Mg2 +раствором PBS. Ослабить прикрепившиеся клетки, используя 3 мл 0,05% трипсина / EDTA раствора на колбу. Деактивируйте раствор трипсина, добавив 5 мл полной MEF среды.
11. Собрать клетки из различных колб и подсчитать количество жизнеспособных клеток с использованием красителя трипанового синего и гемоцитометра. Жизнеспособность должна быть в пределах 90-95%. Центрифугируйте клеточную суспензию при комнатной температуре в течение 4 мин при 200 г. Отберите среду, а клетки вновь разбавьте в полной среде при MEF 2x - желаемой конечной концентрации для замерзания (т.е. 2.4x10`7 / мл). Добавить равный объем фетальной бычьей сыворотки с 20% DMSO, чтобы получить окончательную концентрацию 1x для хранения. Разлить по 1 мл на криопробирку и заморозить. Каждая пробирка содержит 1,2 х 10`7 MEF клеток.
12. Заморозить клетки в криоконтейнере. Контейнер хранится при комнатной температуре и заполнен 250 мл изопропанола. Приготовленные криопробирки помещаются в криоконтейнер,и он помещается в морозильник с -70°C на ночь. Такая процедура обеспечивает охлаждение минус 1 градус в минуту, важный шаг, чтобы сохранить жизнеспособность клеток. После одной ночи, криопробирки убирают из криоконтейнера и помещают в жидкий азот (-196°C) для долгого хранения.
Вы получили ваши первые эмбриональные клетки!
Вы восхитительны!
Поздравляем!
1. Интересна ли будет методика получения стволовых клеток ?
Стволовая клетка – это незрелая клетка, способная к самообновлению и развитию в специализированные клетки организма
или же
2. Фотографии клонированных собак в Корее по странам.
Наглядная история клонирования.
п.с. - я нахожусь сейчас в том самом известном институте клонирования в Сеуле и изучаю методику клонирования у них.
И вопрос был такой
"Почему именно в Корее впервые клонирована собака и сейчас там это дело развито?"
Ответ: в комментариях
Для клонирования собак необходимо огромное количество яйцеклеток. Наиболее быстрый способ получить много яйцеклеток - напрямую из яичников мертвых собак. В азиатских странах проблема с этим не стоит, из-за их местной кухни. Поставщиков собачьих яичников много.
Что же нужно, чтобы получить клонов своей собаки? (фото 1 - клоны тибетского мастифа)
1. Во первых, ткань с живыми клетками вашего животного. Подойдет кожа с малым количеством мускул. По размеру 1 на 1 см. 4-5 штук проб. (фото из интернета)
2. Яичники собак, чтобы выделить яйцеклетки собак для клонирования.
Вот эти
3. Суррогатная сука, в которую поместим будущий эмбрион и она будет вынашивать и кормить в первое время.
4. Ну и эксперт по клонированию, который может вырастить соматические клетки из ткани собаки донора, потом поместить эти клетки в яйцеклетки, без ядерной ДНК. Посадить зиготы в суррогатную мать.
п.с. - все фотографии мои, кроме одной.