Лабораторная история
Однажды в нашей лаборатории началось нечто странное. Нет, мы не вырастили неизвестных опасных микробов, и даже не выпили случайно пробирку с сальмонеллой. И не подлили ее никому в чай.
У нас начали зарастать посевы. Почему это странно?
Что ж, окунёмся в мир производственной лаборатории. Лаба проверяет все - сырьё, полупродукт, готовый продукт, воду, воздух, персонал, оборудование... А сырье в фармпроизводстве - в основном уже проверенная химоза, а если антибиотик - так ещё и никто на нем не вырастет, бактерии не дураки жрать что попало. В общем, тишь да благодать, колонии на чашках в пределах нормы, редко какой особо вкусный растительный экстракт попадется...
А тут как гром среди ясного неба - растут микробы, да как растут! Раз в пять норму эту превышают. Непорядок. Только странно они растут, из четырёх чашек Петри картину даёт только одна. Ну, то есть три чашки выглядят так
А одна вот так
В принципе, если вы подумали, что микробиолог лошарик и что-то туда занёс, то это и есть первая версия. Чихнул в чашку, пипеткой задел что-то и вылил в чашку растворенную пробу уже грязной. Ну, много вариантов.
Сырье исследовали снова. Из той же пробы - баночки, которую нам отобрали на складе. Там чисто. Но, мы же GMP, нам одного ре-теста мало, надо бы ещё ре-самплинг сделать! То есть отобрать еще одну пробу, и тоже исследовать. Сделали. Все чисто. Коллектив молодой, зеленые мы, мой опыт работы тогда составлял года два-три, и я уже была ведущим специалистом. Начальница, наоборот, опытная, начала следить, как работаем руками. Не над душой стоять, а... Сидишь себе такой в боксе, мирно посевы делаешь, и тут краем глаза замечаешь, что через стекло на двери за тобой следят! Я поначалу чуть не подпрыгивала на стуле, но ничего, привыкаешь)
Все работали правильно.
Ладно, списали на случайность. Микробиология это же как, при количественном анализе посевом на чашки - ± слон. Вся Европа дает точность 50-200%, при точно известном количестве внесённых микробов...
Но тут все повторяется. У другого микробиолога, другой анализ, другой бокс! А бактерии на внешний вид такие же. Ну, схема накатанная, ре-тест, ре-самплинг... Чисто. Начинается мозговой штурм.
Анализ мы делали двухслойным методом. То есть на девственно чистую питательную среду мы выливали из пробирки 5 мл среды с внесенным 1 мл пробы. Проверяем версию о изначально грязных чашках и пробирках. Например, накосячили лаборанты, или автоклав не выдерживает время стерилизации. Но тогда бы росло все, что не приколочено, а не одна чашка из 160! Да, в день лаборатория делала анализов 40 только на микробиологическую чистоту, на считая смывов и воды. На всякий случай начальница следит и за лаборантами. И автоклав проверяем биотестами - в разные места камеры закладываются пробирочки с питательной средой и микробами, которые должны умирать после цикла, и не расти. Это, кстати, готовый тест, то есть специально микробами не разбрасываемся, а покупаем пробирку со всем этим добром. Пока то, сё, время идёт, получаем третий случай. А как известно, первый случайность, второй совпадение, а третий - закономерность.
Начальница дает отмашку исследовать микроба, да потщательней. Ну, стараемся. Смесь спорообразующих палочек. Спорообразующие - да их везде полно... На наших эталонных - кишечную палочку, сальмонеллу, сигегнойку, бациллу не похож никто. Значит, наш музей культур тут тоже не причем, что очень радует. Мне было сказано сохранить культуру микробов этих до следующего раза. А вот тут я лоханулась. Я тогда не знала, как это делается, и просто оставила пробирку с отсеянной культурой. Микробы радостно все съели и умерли, через неделю где-то. На меня тогда даже не ругались, инструкции не было, как сделать не объяснили. Только сама себя идиотом чувствовать я не перестала.
Хотя, эпичнее было, когда мне сказали провести генеральную уборку - дезинфицирующим средством намыть всю лабораторию... Я и намыла. 70% спиртом. Там ещё лаба не новенькая была, а совок-эдишн, где-то кафель, где-то дерево под краской.
Вечером тогда к нам заглянул директор отдела, и сказал, потянув носом, что закусывать надо.
Но вернемся с сдохшим микробам, которые ломали нам головы.
Не думайте, что мы такие - а, заросло, ну и хрен. Это каждый раз были предположения, схемы, откуда, что, как, но все они отпадали за нереальностью. Воздух у нас грязный? Так все было росло. Среды, руки, вода... Все не проходило логичные доводы. Случаи зароста снова были. И не раз. Одно и тоже росло, у всех сотрудников, на всем проверяемом, во всех боксах...
Пока однажды кто-то из нас не заметил, что при плавлении пробирок со средами (в питательной среде агар-агар, плавится полностью при 100°С, застывает при 45°), попала вода в пробирку из водяной бани. Трещина ли в пробирке, крышка не плотно ее закупоривала - уже не важно.
Но воду-то мы тоже проверяем! Это же та же самая вода, что и на производстве. Каждую неделю свежую заливаем в бани, с обработкой спиртом бань. Даже попади в пробирку целый миллилитр воды свеженькой, больше 100 колоний не вырастет. А у нас в разы больше растёт. И вот тут мы проверяем на чистоту воду, которая неделю в банях была. Да, мы её каждый день до 95°С прогревали, при плавлении, но спорообразующие палочки они такие, живучие... И до 200 лет протянут, в спору свою всю генетическую инфу упаковав, да и убить их тяжёло.
В общем, вы уже догадались. Мы увидели ту же картину, что и при всех заростах. Ну.. Вроде бы, мы ж не обладаем приборами, что подтвердят на 100%.
Решение: менять воду в водяной бане два раза в неделю. ВСЁ.
С тех пор все хорошо.
А потом мы и отказались от двухслойного метода, и много лет уже прошло, и даже начальник сменился... Но именно тогда я поняла, что значит быть хорошим микробиологом, потому что способов и путей решения проблемы может быть множество, но верных - единицы.
P. S.
Микробы могли быть и не в самой воде изначально, а попадали в нее в бане, когда мы ставили пробирки на плавку, а снаружи-то они не стерильные...
Фото из интернета, все придумано, как хорошая микробиологическая страшилка.
