Продолжаю держать вкурсе
Стартовал эксперимент, приступаем к получению первичной культуры пульмональных фибробластов. Коллеги из фармдепартамента собираются проверять на них какие-то субстанции, даже не спрашивал, какие.
Начинаем с подготовки. Выводим аппаратуру на режимы:
Мешаем рабочие растворы: среды для культивирования клеток, ростовые сыворотки (baby cow juice на сленге заморских товарисчей), растворы для промывки и всякое. Главное - антибиотиков побольше:
Когда коктейль из нутриентов, факторов роста и антибиотиков готов, берем образец ткани крысиного легкого. Фото забора не будет, не хочу вешать тег "жесть". Скажу только, что научно-этическое законодательство блюдем строго. Вот вам сам образец в пробирке:
Ткань воздухоносная, плавает на поверхности. Через 4 часа первичной деконтаминации от возможных бактерий и грибов образец закидываем в ростовую среду с меньшими концентрациями антимикробных препаратов.
Крупный образец измельчаем ножницами (не смотрите на вид, они стерильные) в труху, чтобы было легче отделить клетки от внеклеточного вещества ткани:
Ножниц никогда не достаточно, поэтому окончательное диспергирование ткани производим с помощью ферментного раствора, который хорошо берет коллаген, но клеточную мембрану пройти не в состоянии. Минут через 15 бОльшая часть клеток будет просто плавать в ростовой среде. Их нужно отцентрифугировать, чтобы помыть от следов фермента, а заодно снова поменять среду на чистую . В результате получаем около 12 миллилитров жижицы, в которой плавают клетки.
Вот эта пыль - свободно плавающие фибробласты, а крупное скопление, скорее всего, недорастворившийся кусочек ткани легкого.
Остается мелочь - залить клеточную суспензию в специальный флакон, крышка которого имеет встроенный фильтр и проницаема для воздуха. Это нужно, чтобы газовая смесь с аж 5% углекислого газа поступала для дыхания. Так надо, фибробластам так норм.
Последний этап на сегодня - отправить флакон в инкубатор, где он будет стоять в темноте и тепле (37 С), а клеточбки будут делитбся.
Через три дня будет ясно, что там вырастет - благодать или грибной WAAAAGH.