Amonara123

ПЦР (полимеразная цепная реакция). Он же ПЛР (полімеразна ланцюгова реакція). Он же PCR (polymerase chain reaction).

В общем, я достаточно долго собиралась написать этот пост. В связи с тем, что за последний год только очень ленивый не запомнил эти три буквы (хотя не факт, что знает, что это и почему); а я ПЦРы в последнее время делаю постоянно - хотела показать, как это работает с «живыми» картинками.

Сразу оговорюсь:

- пробы у меня не опасные и не очень чувствительные ко всяким посторонним факторам, поэтому многие вещи можно делать на "обычном" лабораторном столе, а не в вытяжном шкафу, в полной униформе, с фильтрацией всего на свете и бунзеновской горелкой под боком :D

В общем, могут получаться нормальные фото.

- с тех пор как Кэри Муллис первый раз проводил такой тест в далеком 1983-ем, появилось много разных и все более автоматизированных его подвидов, где «вживую» видно все меньше и меньше, на экране ПК все больше и больше. Я показываю достаточно классический, «ручной» и наглядный вариант. Но когда-нибудь нас, конечно же, захватят роботы и все такое. Кому интересно дальше - в Ютубе миллион всяких видео, конечно же.

Подписи и комментарии ПОД фото.

Итак, начать мне придется с одной картинки из интернета - это принцип работы ПЦР в целом. Сюжет такой: мы берем ДНК, вспоминаем, что она – двойная цепочка, разделяем их, строим к каждой половине пару и получаем из одной ДНК уже две ее точных копии. На следующем шаге располовиниваем обе свеженькие копии ДНК, достраиваем к каждой из частей вторую половинку и получаем уже 4 одинаковые копии исходной молекулы и повторяем этот процесс раз этак 30-40. В итоге получаем из одной исходной ДНК 2^30 ДНК (=1073741824=больше миллиарда копий).

Все это мы делаем, обеспечив нашей ДНК уютную среду обитания (буферную жидкость), «кирпичики» строительного материала ДНК (нуклеотиды, обозначаются буквами A, T, G, C), копировальную машинку (полимеразу) и специфичные ПРАЙМЕРЫ (схематичные малиновые штучки на картинке. Вживую они примерно 20 нуклеотидов в длину, что дает одну на более чем триллион специфичную комбинацию (это 12 нулей)). Праймеры нужны для того, чтобы копирование вообще началось, т.к. копировальной машинке надо за что-то зацепиться. И чтобы копии делались только с очень определенного места, если оно, конечно же, вообще есть в нашей пробе.

Зачем это все нужно? Затем, что у любого анализа есть порог чувствительности и погрешности, ДНК очень маленькие и чем их больше, тем точнее и нагляднее результат.

Тут еще важно сказать – если в пробе нет подходящей последовательности, т.е. изначально подходящих кусочков 0 – то после 30-ти циклов будет 0^30 копий – т.е. все еще НОЛЬ и тест покажет зияющую пустоту.

На этом заканчиваем с чужими картинками :)

Моим друзьям программистам может многое объяснить вот это фото. По сути мы просто нагреваем и охлаждаем нашу смесь до нужных для каждого этапа благоприятных температур по кругу (в данной программе даже 40 раз, создавая даже 2^40 копий ДНК).

Кэри Мюллис в свое время делал это вручную, 2-3 часа подряд окуная пробирку в воду разной температуры каждые 30 секунд, наверняка обложенный миллионом таймеров, термометров, нагревателей, охладителей и протоколов. Можно только посочувствовать.

Сейчас этим всем занимается машина размером с принтер, задача человека «только» намешать нужную смесь, рассчитать и вбить нужную программу, и тд.

Пробы. Пока что это просто кусочки ткани. Может быть и кровь, в принципе, итд.

Путем некоторой (крайне ненаглядной со стороны) подготовки ДНК из них переместится в прозрачную для глаза человека жидкость.

Объём пробирки на фото - 1,5 мл.

Пробы надо внимательно сортировать и подписывать. В больших лабораториях, куда попадают ваши пробы все это уже автоматизируется, клеятся уникальные штрих-коды в духе тех, что вы могли видеть на пробирках для крови и тд. Но по большому счету принцип тот же – все должно быть четко пронумеровано, подписано и запротоколировано (несколько раз).

Затем для каждого ПЦР готовится нужный «суп» из всех упомянутых ингредиентов. Цвет его не принципиален, тут у нас просто буферная жидкость была розовая (чему я всегда безумно рада, потому что человеку с цветной жидкостью работать удобнее, чем с прозрачной, честно-честно)

«Суп» разливается по специальным ПЦР-тубам и в каждую добавляется немного растворенной, концентрированной и хорошо перемешанной пробы - специфично для каждого теста, типа пробы и тд.

Тут вы видите в наконечнике 1 МИКРОлитр жидкости (1/1000 миллилитра).

Это мало, да. Но реактивы – вещь дорогая, а этого достаточно – увидим в конце второго поста.

Если вам интересно, что это за выцветающая фиолетово-розовая штука – это охлажденный блок, который меняет цвет в зависимости от температуры. Дело в том, что полимераза («копировальная машинка») очень чувствительна к перепадам температуры и мы не хотим, чтобы с ней случилось что-то не то на этапе подготовки.

По итогу в каждой ПЦР-тубе оказывется 50 МИКРОлитров смеси «супа» и пробы (1/20 миллилитра, всего в ПЦР-тубу мжет под завязку поместиться 0,2 миллилитра).

*Из забавного - тут очень пригождается навык сбивания ртутных и спиртовых градусников – разлитые по тубам (и закрытые крышкой!) пробы нужно встряхнуть одним старым-добрым четким движением руки - чтобы избавиться от пузырьков воздуха, которые могли остаться в жидкости и могут испортить все дело. При этом жидкость не размажется по стенкам и крышкам, а останется вся внизу. Ну если сбивать «правильно». У (очень молодых) людей, которые всю жизнь пользовались уже электронными термометрами, с этим этапом часто большие проблемы)))).

Все это дело отправляется в нашу запрограммированную нагревательно-охладительную машину. Естественно, мы все подписали и запротоколировали несколько раз. И ушли ждать конца программы.

*Из забавного - на тубах стало еще меньше места, поэтому биологу внезапно оказывается очень полезен навык письма очень маленькими символами. Но все равно приходится упрощать нумерацию до минимума и записывать в протоколах, что под номером 1 в программе, запущенной 15.01.21 в 18:43 на 5ой машине находилась проба номер 5462368479 из проекта jgdfjvb_gyrgfhsd_2А.

Что будет дальше, пожалуй, напишу вторым постом, и так много. Мы пока на середине процесса.

Девушка смастерила хуюмбул из полимерной глины

В общем, у меня есть кот(ы). И решила я тут рассказать о том, какая техника помогает их кормить и поить.

Старшенькому 6 лет, весной вывели его из разведения и взяли дочу из последнего помета, чтоб гоняла папку и он жирком не заплыл ;) Мелочи 5 месяцев.

Итак, часть первая. Питье:

Коту первый фонтанчик мы взяли года три назад. Вот этот:

Catit на 3 литра. (фоточка от произвозителя)

В комплект входит мисочка для корма, которую можно присоединить к фонтану. Но мы ее сразу убрали в кладовку ибо:

- еда может намокнуть

- воду вообще не советуют ставить рядом с едой, а на более проходимой части, чтоб чаще пил

- тарелка пластиковая и у нас своих нормальных хватало

К этому фонтанчику можно купить стильный силиконовый коврик того же бренда, но мы на него изначально элементарно зажлобились. А поняв, что вообще без коврика вибрация слышна сильнее, заменяли сперва несколькими плотными тканевыми ковриками, потом нашли плотный резиновый коврик попроще.

Запомним главную аксиому: коты - редкостные консервы. Поэтому кот обходил фонтанчик стороной НЕДЕЛЮ (на это время, естественно, нельзя убирать миску с водой, а надо держать ее рядом). Потом кот настолько привык к нему, что если мы его выключали - копал его лапой как будто зная, что родник можно раскопать.

В этом фонтанчике очень удобный резервуар с запасом воды (~1,5 литра) и коту нравилось пить прям с колбы (как серый кот с рекламы), а не только из открытой ёмкости (рыжий рекламный кот; кстати, наш при этом пьет от противоположного борта и купает весь свой воротник в воде).

Воды хватало примерно на полторы недели, потом моторчик начинал безбожно хлюпать и задыхаться от недостаточного уровня воды. В принципе, можно долить ещё чуток на пару дней или в колбу, но как показала практика и логика - не вся вода проходит через фильтр -> бактерии накапливаются, лучше помыть. Так что мыли мы его раз в 1,5-2 недели (без моющих средств, естественно). Летом оставляли на денёк на солнце, зимой обдавали после промывки кипяточком. На время помывки ставили миску с водой.

Вообще именно мытьё оказалось самым сложным у этого фонтанчика и у него при этом есть два существенных минуса:

1) Материал - пластик

При первой же помывке мы использовали обычную губку, что заметно по красивым царапинам на колбе. Потом с мочалок жёсткая сторона обрывалась, в ход пошли ещё и зубные щетки и ватные палочки, но царапины, конечно же, так и остались.

2) Куча красивых, но капец сложных для мытья загогулин.

Если бы мы изначально почитали инструкцию, то узнали бы, что моторчик тоже разбирается.

Но так как инструкции для слабаков, то обнаружили мы это спустя пару месяцев, недоумевая, почему биоплёнки стали быстро накапливаться даже при регулярном мытье.

Капитально вымыв моторчик и промывая все в дальнейшем проблема решилась.

Но мытьё все равно было муторным.

С учетом перспективы, что пить два кота будут больше и мыть надо будет ещё чаще, этой весной фонтанчик было решено заменить.

Я провела долгие часы или дни в поисках хорошего варианта.

Иииии... казалось бы продвинутая индустрия меня очень огорчила.

Серьёзно, они все какие-то дурацкие: то загогулины, то маленький объём, то керамика=микротрещины=бактерии, то плохой пластик (опять же), то все вместе...

Я знаю, что очень популярен фонтанчик с цветочком. Но он полностью пластиковый и вода с цветочка прям спадает знатно хлюпая.

И загогулины все же есть. (еще одна фоточка от произвозителя)

(У мелкой кошки с детстваьыл фонтанчик и как таковым приучивать ёё вообще не пришлось).

Пересмотрев казалось уже весь интернет, я взяла «нержавеющий» фонтанчик от Catit (разновидностей у них в принципе больше всего и еще не самые безумные).

И..... вернула его через неделю, ибо:

- нержавеющей у него оказалась только крышка, остальное - пластик

- в пластиковой емкости провод вставлялся в некий желоб, который закрывался отдельной тонкой полоской пластика и я уже предвидела счастье его мыть и когда он начнёт заедать.

- нет поверхности, по которой вода спадает. Она неравномерно хлюпала вверх, тут же уходила вниз и все (на любой настройке помпы)

- объём был меньше (2 литра), а помпа могла бы находиться и пониже - это напрямую влияет на то, как часто надо доливать воду, мыть фонтан,...

Решение нашлось случайно среди собственной торговой марки от Fressnapf = AniOne (Hausmarke)

Единственная моя претензия к нему:

- провод немного коротковат (если розетка в стене на уровне пояса - то особо фонтан от стены не отодвинуть, а коты любят есть и пить, «защитив» спину стеной, так что им не всегда очень просторно с этим проводом).

Ну и фильтры дороже Catit‘овских и заменить их на Catit‘овские нельзя - они меньше чем расстояние до отверстий в этом фонтане, что сводит весь смысл фильтра на нет.

Но хватает их на дольше и они солиднее круглых сменок Catit, которые вообще ни разу не такие, как комплектный фильтр.

Единственная относительно «труднодоступная» деталь - узкая резиновая трубка, по которой вода поднимается от насоса, но это решается достаточно просто.

А что любой моторчик надо мыть мы уже знаем.

Плюсы:

- максимально минималистичная конструкция

- резервуар = тупо нержавеющий цилиндр, можно мыть в посудомойке (но не особо и надо)

- 3 литра воды

- насос низко

- вода не хлюпает и стекает

- вся вода обязательно проходит через фильтр

Надеюсь остальные производители тоже вскоре додумаются до простых и эффективных решений и нормальных фонтанов вскоре станет больше.

В целом - покупайте фонтанчики как таковые.

Коты пьют больше, а возня с мисками осталась в прошлом. Очень рекомендую.

И когда уезжаем на день-два можно вообще не париться, не перевернут ли они воду, хватит ли ее итд. Если уезжаем на дольше - не надо напрягать людей еще и миску для воды мыть.

Про кормушки напишу отдельно, тема тоже большая. Скажу только, что теперь у нас автоматические кормушки с распознаванием по чипу животного. Сама в шоке )))

У меня в ленте FB зачастили посты в духе «как организовать сортировку мусора в квартире?».

Поэтому я несколько дней собирала фоточки для наглядности и тема будет минимум в двух частях, потому что многобукаф.

Часть первая. «Куда девать хлам».

У нас в квартире все распихано по разным местам (для фото собрала вместе).

1. Gelber Sack - специальные (желтые) пакеты литров этак на 120. Они для упаковки (пластик, жесть, фольга, тетра-паки,..)

К концу года в почтовый ящик каждой квартиры кидают «талоны на талоны», с которыми ты идёшь в ближайший пункт выдачи и получаешь 3 рулона по 13 штук.

На человека считается нормой 13 пакетов в год, на семью из двух человек - 40, т.е. один пакет на чуть меньше, чем полторы недели. У нас один пакет стоит недели 2,5-3 (минутка гордости, сам себя не похвалишь...)

Если пакеты закончились - можно создать заявку и тебе пришлют ещё пару талонов. Или можно долгануть у знакомых, у которых они остаются.

Вообще слышала от немцев постарше, что раньше их можно было получать чуть ли не сколько угодно. Но особо предприимчивый бюргер использовал их для крыш и все такое (бесплатно же). Что просочилось, был скандал, государство обиделось и благоразумно прикрыло безлимитную лавочку.

Ещё я недавно посмотрела видео, как пластик потом сортируют и тд. (оно на немецком, так что его тут не будет). Я им впечатлилась и прям начала полностью отрывать фольговую крышечку от стаканчика, отвинчивать крышки и разделять разделяемые куски упаковки друг от друга. Хотя все это все равно лежит в одном мешке, на сортировке так лучше. А по времени, на самом деле, вообще недолго и совмещается с другими делами (готовка, разговор,...).

Общий вид:

2. Бутылки под залог.

Собираются в тканевые сумки (благо их хватает, их раздают много где со всякими логотипами)

Тонкий одноразовый пластик и жестянки с чёрным логотипом - 25 евроцентов, толстый многоразовый пластик - 15 центов, стекло 8 центов.

Многоразовое обычно видно по чудесным счёсанным линиям от конвейерной ленты.

Самая правая пластиковая бутылка без залога, так тоже бывает. Ее в пакет п.1.

В связи с большим весом и дешевизной, стекло нередко оставляют на улице (пить на улице можно). Оно бьется и лично я уже минимум два-три раза меняла камеру велосипеда, нарвавшись на подлый осколок на дороге.

3. Бумага, картон.

Я складирую в коробки из супермаркетов (часто беру покупки в них). Так, в принципе, делают некоторые, если покупка не на всю корзину. Магазину только лучше, меньше платить за вывоз.

Коробка у нас стоит на кухне под умывальником за дверкой, т.к. место свободно - другой мусор растыкан по другим местам.

Ещё в нашем доме у почтовых ящиков стоит корзина для откровенного спама и совсем ненужной прессы. Некоторые люди на ящиках пишут «пожалуйста, никаких газет и рекламы», но всякие фитнесс-клубы, пиццерии, магазины слуховых аппаратов и церковные общества это не особо останавливает.

4. Био. Изначально я считала, что «био»- это для всего биологического/натурального/быстроразлагаемого.

Потом меня обломали, что туда нельзя, например, крупные косточки от курицы или абрикос. Потом начались ограничения по продуктам животного происхождения и вроде бы туда их вообще нельзя, но это все у всех может отличаться.

С этого года на нашей улице запретили для био все пакеты, даже биоразлагаемые (они как бы все равно долго разлагаются и тд.)

Баки стали жутко вонять, выкидывать стало адски неудобно и тд.

При этом соседняя улица выкидывает в пакетах (потому что фирма вывозит другая).

В общем, сейчас у нас био - это легко компостируемые травки и зеленухи, которые оставляют перегнивать с землёй и потом продают людям обратно в виде земли для цветов.

Летом появилось ещё ведро 4а на балконе, т.к. я там активно играю в садовода и обрезков получается прилично.

Слева на право: био, рест, бумага, пластик

5. Rest. Оно же «прочее»

Прокладки, бумага для выпекания, куриные кости, грязная гадость, порванные шмотки и тд.

Кстати, мне сказали чеки тоже в Rest, а не в бумагу. Не та бумага, видите ли.

На самом верхнем фото с номерами видим три емкости.

Одна на кухне, 5а в ванной (открывать я ее не стала, там вонючий biohazard в виде использованного кошачьего наполнителя), 5b стоит припрятанным под столом в гостиной и там, собственно, чеки, ушные палочки, кости от абрикос, персиков, обрывки скотча и прочая почти чистая мелочь, которую на кухню каждый раз носить не станешь.

Когда 5 и 5а наполняются, 5b я просто перекидываю в один из них и пакет остаётся стоять дальше.

6. Стекло без залога.

Недавно выкидывалось, поэтому на фото мало.

Тут все достаточно понятно - отвинчиваешь крышки (предварительно захватив с собой для них пакетик) и кидаешь стекло в контейнер по цвету.

Крышки потом в пакет номер 1.

Хотя есть два нюанса:

а) Бокалы, вазы, керамику, оконное стекло, зеркала, стекло с содержанием свинца и тд. - это не в стекло, это в Rest.

б) Выкидывать можно только по будням с 8 до 19-20, ибо типа кому-то шумит. Ой-вэй.

7. Батарейки, энергосберегающие лампочки, аккумуляторы,...

Сдаются в Rossmann, dm, Müller (магазины типа «Евы») и некоторых супермаркетах.

Но взять их с собой мы обычно забываем и чаще всего в магазин заезжаем ПО дороге домой, а не из дома. Поэтому они складируются в маленький пакетик в кладовке и ждут своего часа.

Поломанную подстрижечную машинку надо бы отнести к куче техники (она в подвале, см.ниже)

Обычные не энергосберегающие лампочки выкидываться в Rest.

Ну как бы в доме всё.

Существует ещё пункт приема токсичных отходов, но нам туда пока не надо было.

Один раз разбился привезённый ртутный градусник, но я как раз проходила очередную практику по химии и просто принесла это дело в универ, где есть отдельные виды утилизации всяких химикатов.

(связи везде решают. У немцев даже есть фраза „Man braucht immer bisschen Vitamin B“ = всегда нужно немного витамина В. Только под В подразумевается Beziehung = отношения/связи)

Ну и крупногабаритный мусор:

У нас в подвале ещё стоят 3 сломанных стула, перегоревший чайник, нерабочий принтер, старая полка и прочая крупногабаритная гадость, которую надо вывезти на специальную свалку в другой части города.

Там на въезде дяденька примерно на глаз определяет количество кубометров хлама и сообщает сумму из расчета 6 евро/кубометр.

Дальше ты идёшь со своим добром на рампу и кидаешь дерево к дереву, железо к железу,...

/*Забавная ремарка - знакомые выкидывали стиралку и там же на месте их прервал другой человек и спросил, можно ли ее забрать. Конечно же, отдали.

Есть такие фирмы - они по домам и улицам собирают сломанное, чинят и продают желающим евро этак за 80-120 под гарантию обмена в течении года-двух, если оно накроется*/

Но так как у нас ещё нет машины, - оно тоже ждёт с моря погоды, подвернувшейся возможности или переезда.

Можно заказать контейнер, особенно для строительного мусора (его привезут и увезут через какое-то время, оплата вроде бы по кубометражу, тарифа не знаю).

Но у нас не настолько много крупногабаритного мусора и мы пока стройками не занимались, так что не заказывали.

Зато знакомые говорили, что надо заказывать контейнеры с замком и крышкой, потому что соседи имеют свойство «незаметно» догружать в такие контейнеры свои ковры, стулья, ...

Как разумно решать проблему выброса одного стула людям без машины и подвала - не знаю. Искать знакомых с машиной, наверное.

А, ещё ненужную нормальную одежду в контейнеры на фото где стекло (на гуманитарную помощь или сэконды). Дырявую и плохую - в Rest.

Почему на фото вокруг контейнеров валяются доски, сушилка для белья и всякая гадость? Потому что люди - свиньи. И, очевидно, не все ищут знакомых с машиной.

И в связи с мнением некоторых людей о том что «люди должны быть сознательными сами, вот в Европе...*дальше очередной утопический текст*»:

- даже в одном не особо большом городе на разных улицах сортируют и не сортируют.

Заниматься самодеятельностью и сортировать не имеет смысла.

Если фирма, отвечающая за райончик этого не заберёт или скинет все в кучу, то толку от этого не будет.

- Правильность сортировки контролируется банальными штрафами.

Найдут слишком много стекла не того цвета в контейнерах - повысят стоимость для всего района.

Много левых вещей в пакетах для упаковки? Дадут желтую карточку.

Потом красную и больше не будут заезжать.

В нашем доме 6 квартир и офис.

После смены правил кто-то кинул био с пакетом - мусор остался стоять с желтой карточкой сверху и припиской «уберите лишнее. Найдём ещё раз - больше не приедем».

Напоминание до сих пор в подъезде висит.

- Культуру сортировки здесь прививают поколениями и с самых первых лет садиков, школ и тд.

Целенаправленно, централизовано и постоянно.

И тем не менее, много где мусор не сортируется, даже в учреждениях и публичных местах.

Напоминалка про штраф если кто пластик в био выкинет:

Спасибо всем кто дочитал длинопост. Позже будет вторая часть.